目标蛋白翻译后修饰位点确认技术
技术原理
肽段中发生翻译后修饰的氨基酸位点，在质谱仪中响应的信号与未修饰的信号质荷比有固定差值。在对质谱数据搜索数据库时，根据不同的修饰类型设定相应的参数，即可鉴定到目标蛋白的翻译后修饰位点。
应用领域 -
目标蛋白磷酸化、糖基化、泛素化、乙酰化等翻译后修饰位点的鉴定
技术优点
蛋白质修饰位点覆盖度高
修饰位点准确度高
样品要求
- 纯化蛋白质提取物 ≥2 μg
可选仪器
- Obitrap Fusion Lumos
- Obitrap Fusion
- Q Exactive HF
- Q Exactive Plus
- Q Exactive
技术流程
样本提取目标蛋白质，蛋白质经过纯化、还原、封闭后蛋白酶酶切（通常为trypsin），肽段混合物液相分离后，进行MS/MS质谱检测。然后对质谱仪产出的数据进行蛋白质组鉴定及生物信息学分析。
数据分析内容
- 质谱数据质量评估
- 数据库鉴定数据统计
- 磷酸化肽的鉴定及定量结果
- 目标蛋白的磷酸化谱图确认
- 目标蛋白GO (Gene Ontology) 注释分析
- 目标蛋白KEGG Pathway通路富集分析
- 目标蛋白质相互作用网络分析
参考文献
Witze, E. S., Old, W. M., Resing, K. A., & Ahn, N. G. (2007). Mapping protein post-translational modifications with mass spectrometry. Nature methods, 4(10), 798-806.