多反应监测（MRM/PRM）靶向蛋白质组技术
技术原理
多反应监测（MRM/PRM）技术仅对目标蛋白质的代表性肽段进行检测，质谱仪靶向采集这些代表性肽段信号 ，从而获取目标蛋白的定量信息。结合加入的同位素标准肽段定量信息，可实现蛋白质的绝对定量。
应用领域 -
目标蛋白质的绝对丰度；蛋白质分子标志物的验证
技术优点
定量准确度高
无需抗体，更准确、高通量验证蛋白定量结果
PRM方法可直接检测所有二级离子，无需进行二级离子的挑选
样品要求
- 蛋白质提取物 ≥50 μg
- 细胞 ≥10^6 个
-
组织
≥10 mg （动物组织）
≥10 mg （植物组织） -
体液
≥5 μL （血清、血浆）
≥25 mL（尿液）
≥5 ml（唾液、脑脊液等体液）
可选仪器
- Obitrap Fusion Lumos
- Obitrap Fusion
- Q Exactive HF
- Q Exactive Plus
- Q Exactive
技术流程
样本提取目标蛋白质，蛋白质经过纯化、还原、封闭后蛋白酶酶切（通常为trypsin），肽段混合物液相分离后，进行MS/MS质谱检测。在质谱检测窗口中设置靶向检测列表，采用MRM/PRM方法进行质谱数据采集。然后对质谱仪产出的数据进行蛋白质组鉴定及生物信息学分析。
数据分析内容
- 质谱数据质量评估
- 数据库鉴定数据统计
- 目标蛋白质的鉴定及绝对定量结果
- 目标蛋白质GO功能分析
- 目标蛋白质信号通路分析
- 目标蛋白质相互作用网络分析
参考文献
Domon, B., & Aebersold, R. (2006). Mass spectrometry and protein analysis. science, 312(5771), 212-217.
Kim, H. J., Lin, D., Li, M., & Liebler, D. C. (2015). Quantitative profiling of protein tyrosine kinases in human cancer cell lines by multiplexed parallel reaction monitoring assays. Molecular & Cellular Proteomics, mcp-O115.