iTRAQ定量蛋白质组学技术
技术原理
iTRAQ (Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)技术是生物学蛋白质组学研究领域应用最广泛的蛋白质标记定量技术。该技术通过与多肽氨基末端或赖氨酸侧链氨基结合，实现对多肽的标记。在质谱分析时，不同样本的同一肽段标记后，具有相同的质荷比，被同时选择进行二级碎裂，产生质量不同的报告离子，通过报告离子的丰度实现不同样品间蛋白质的定量。
应用领域 -
适用于不同样本的差异蛋白质组定量研究
技术优点
适用于各种动植物组织、细胞、微生物、体液样品分析
一次实验同时对多达2-8个样本进行定量分析
一次实验可获得高通量的定量数据
样品要求
- 蛋白质提取物 ≥100 μg
- 细胞 ≥10^7 个
-
组织
≥100 mg （动物组织）
≥10 mg （植物组织） -
体液
≥500 μL （血清、血浆）
≥25 mL（尿液）
≥5 ml（唾液、脑脊液等体液）
可选仪器
- Obitrap Fusion Lumos
- Obitrap Fusion
- Q Exactive HF
- Q Exactive Plus
- Q Exactive
- Triple TOF 6600
- Triple TOF 5600
技术流程
样本经过不同处理后提取蛋白质，蛋白质经过还原，封闭后蛋白酶酶切（通常为trypsin），肽段混合物分别用不同的通常为iTRAQ试剂标记，等量混合各种iTRAQ试剂标记的肽段，液相分离后，进行MS/MS质谱检测。然后对质谱仪产出的数据进行蛋白质组鉴定及生物信息学分析。
数据分析内容
- 质谱数据质量评估
- 数据库鉴定数据统计
- 多样本间分类统计、聚类分析 (适用于样本数大于3)
- 蛋白质GO (Gene Ontology) 富集分析
- KEGG Pathway通路富集分析
- 蛋白质相互作用 (PPI) 网络分析
参考文献
Unwin, R. D., Griffiths, J. R., & Whetton, A. D. (2010). Simultaneous analysis of relative protein expression levels across multiple samples using iTRAQ isobaric tags with 2D nano LC-MS/MS. Nature protocols, 5(9), 1574-1582.